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Bonjour, d’abord, je tiens à vous remercie pour votre présence aujourd’hui, je vais vous présente brièvement mon avancement sur ce sujet intitulé : l’étude de la diversité de Moringa oleifera par approche cytogénétique morphométrique et moléculaire Le plan de la présentation sera comme suivant, une petite introduction, parler de l’objectives, matériel et méthode utilisés résultats et finir par conclusion et des perspectives L’amélioration des plantes a pour but de créer de nouvelles variétés à partir de la diversité existante. L’une des méthodes d’amélioration, consiste à croiser deux plantes choisies pour leurs caractères intéressants et complémentaires afin de les réunir dans une seule plante. Cet auteur a défini quelque caractère de sélection de Moringa : Sélection des types facile à accessible Variétés adaptées à l'usage foliaire, Développement de types à rendement élevé, Sélection de variétés avec plus de graines et d'huile, Développement de types résistants aux ravageurs et aux maladies L'évaluation de la diversité génétique est un préalable indispensable à la définition des stratégies d’amélioration c’est pour ça on a opté à dans un 1er temps, d’étudier la diversité par différente approche à savoir : au niveau moléculaire, morphologique cytogénétique et agronomiques, afin de sélectionner les arbres d’intérêts en vue d’une possible utilisation pour l’extension de l’espèce au Maroc. Quelques variétés de Moringa oleifera et leurs caractéristiques les plus connu est le PKM1 Il s'agit d'une sélection de lignée pure développée par autofécondation continue pendant six générations, À chaque génération, seuls les longs fruits et les caractères désirable sont sélectionnés cette variété est sorti en 1989 Le 2eme est PKM 2 Moringa annuel C'est une variété dérivée par hybridation ; d'un croisement entre deux variétés Notre travail durant cette année a porté sur : Caractérisation agro-morphologique sur le rendement en huile (suivie 2eme année). Phytochimique des feuilles Caractérisation cytogénétique Pour enfin sélectionner les génotypes élites qui vont être utilisés dans un programme d’amélioration. Durant les activités qu’on a effectué durant cette année Pour cette partie consacrée à l’extraction d’huile à partir des graines de Moringa, La préparation des échantillons regroupe l’ensemble des opérations qui préparent la matière première à la trituration et l'extraction. À savoir : le triage, le décorticage, le broyage et le séchage. L’extraction d’huile a été effectué par la méthode d’ultrason en utilisant l’hexane comme solvant, avec 10 g du broyat, dans 80mL d’hexane pendant 45min ; suivie d’une agitation pendant 15min, filtration et une évaporation l’aide du Rotavator Pour les mesures morphométriques Les mesures morphométriques ont été mesurer sur 3 niveaux à savoir, ’l’arbre, les fruits, et les feuilles Pour mesures effectués sur l’arbre sont :1) hauteur maximale 2) la moyenne du diamètre basale des tiges 3) le nombre de tronc 4) l’occupation de l’arbre, 5) Et le nombre de fruits par arbre, Pour les fruits les mesures en été porté sur : 1) Poids sec du fruits 2 Nombre de graines par fruit, Longueur et largeur du fruit Poids de graine par fruits Et leurs diamètres. Enfin pour les feuilles ont été porté sur 1) La longueur de la feuille 2) Nombre de folioles et pinnules, La surface foliaire, et La teneur en chlorophylle l’aide d’un appareil dédié à ce type de dosage Pour les l’étude phytochimique des feuilles , d’abord Nous avons procédé à une extraction méthanolique des feuilles après avoir collecter et sécher les feuilles à température ambiante pendant 7 jours, dans le but de doser la teneur en polyphénol, et l’activité antioxydante. L’extraction a été effectué par la méthode d’ultrason, avec 0.5g des feuilles séchées dans 25mL du méthanol, pendant 30min, suivie d’une centrifugation filtration et une évaporation de l’extrait à sec l’aide du Rotavator Les polyphénols ont été dosés par spectrophotométrie selon la méthode de Folin-Ciocalteu Lorsque les polyphénols sont oxydés, ils réduisent le réactif de Folin-Ciocalteu en un complexe de couleur bleue L'intensité de la couleur est proportionnelle au degré de composés phénoliques oxydés 20ul du l’extrait, avec 1 ml du réactif dilué 10fois, sont mélangé dans un tube à essai, ensuite 800ul de carbonate de sodium 20% a été ajoutés, Un dosage à 760nm a été effectué après un repos à l’obscurité pendant 2hours Pour le test du DPPH, il s’agit d'une méthode colorimétrique basée sur la capacité de substances dites antioxydantes à céder un électron au radical synthétique DPPH. Cette réduction conduit à un changement de couleur violette de la solution méthanolique de DPPH vers une couleur jaunâtre 1950 µl de DPPH sont ajoutés à 50 µl d’extrait. Le mélange est incubé pendant 30 minutes à l’obscurité ; un contrôle est préparé avec 50 µl du méthanol, puis incubation pendant 30 minutes à l’obscurité (La lecture se fait au spectrophotomètre à 515nm contre un blanc (méthanol) (Brand William et al., 1995). LA TENEUR EN PROTEINES TOTALES a été effectué par méthode de klejldar, 0,25 g d‘échantillon, 3g de catalyseur et 6 ml d‘acide sulfurique concentré sont introduits dans le matras de la minéralisation. Ce dernier est chauffé pendant 2 heures à 380°C, Le minéralisât obtenu est transvasé dans le tube du distillateur. Un bécher contenant 20 ml d‘acide borique est placé sous le tuyau évacuateur du distillateur. Le distillat contenant l‘ammoniac est dosé avec une solution d‘acide sulfurique jusqu‘à la persistance du virage de coloration au rose. L’azote organique a été transformé en ion ammonium et le carbone a été éliminé sous forme de CO2 et l’hydrogène sous forme d’eau Pour la teneur en cendre, 1 g de la poudre de M. oleifera de chaque échantillon a été mis dans les creusets et puis l’ensemble a été introduit dans le four à moufle. À 550° C. Les creusets ont été récupérés après refroidissement au dessiccateur, et les poids ont été notés. DOSAGES DE K, Calcium et Na ont été effectué par PHOTOMÉTRIE à FLAMME, les cendres obtenues ont été attaqué par 5ml d’acide chlorhydrique, pendant 30min, un rinçage avec 50ML d’eau distillée suivie d’une filtration par papier filtre, suivie d’une lecture sue photomètre à flame Pour le phosphore : 5 ml de filtrat additionnés 10 ml de Vanmolybdate dans des fioles jaugées de 50 ml et a été ajusté au trait de jauge avec de l’eau distillée. Après homogénéisation par agitation manuelle, la lecture a été faite au spectrophotomètre à 420 nm contre un blanc Pour l’étude cytogénétiques, Afin d’obtenir des points racinaires, ont procédé à une germination dans des conditions aseptiques, les grains ont été soumis à une désinfection dans l’eau de javel 50 :50, pendant 10min suivie d’un rinçage de 10min, 3fois Les graines sont mises dans une chambre de culture jusqu’à l’obtention de racines de 1 à 1.5 cm de longueur. La 2eme étape consiste à bloquer les chromosomes au stade métaphase, on a testé 4 solutions de fixation avec différence concertation et différente durée de temps Ensuite, Les racines sont mises dans une solution de Carnoy 1 pendant 24 heures, ensuite conservées dans éthanol 70% Pour l’hydrolyse on a testé 2 concertations avec combinaison de temps et température Pour l’étape de coloration, on a testé 5 colorations, acétone carmin, acéto orcéine, hématoxyline, giemsa et shift avec différente durée. Cette figure montre les projections des variables mesurés sur l’arbre et les fruits ainsi que le rendement en huile sur les 2 axes. La partie en haut regroupe les mesures effectuées sur les fruits, alors en bas essentiellement par les mesures portées sur l’arbre, Les 3 variables : largeur de fruits, de nombre de graines et de poids sec de fruits sont corréler, le petit tableau à droit montre les individus qui ont des valeurs maximales pour les variables mentionner, et valeurs en rouge sont les valeurs minimales pour chaque variable. Nombre de graines par fruits varie entre 9 et 21 graines par fruits, et poids de fruits entre 8.5g et 17.70g, la largeur du fruit entre 1et 4cm L’arbre 1-8 qui a la plus grande valeur pour le nombre des graines donc pour poids des fruits suivie Par L1-2, Le L3-8 se caractérise par un diamètres d du fruit le plus large avec environ 4 cm. Nombre de graines par fruits varie entre 9 et 21 graines par fruits, et poids de fruits entre 8.5g et 17.70g, la largeur du fruit entre 1et 4cm L’arbre 1-8 qui a le plus grande valeur pout le nombre des graines donc pour poids des fruits suivie Par L1-2, Le L3-8 se caractérise par un diamètres d du fruit le plus large avec environ 4 cm. Le poids des graines et leurs diamètres sont bien corrélés, le poids des graines varie entre 1.11g et 5g leurs diamètres entre 1.62 et 11.60mm, L2-3 e, L1-4 et L1-8 ont des valeurs les plus élevées les plus élevées pour ces mesures On voie une corrélation positive entre la hauteur et arbres, leurs diamètres basals et leurs occupations de l’arbre Hauteur des arbres varie entre 1.25m et 6m de Hauteur, Occupation d’arbre entre 0.63 et 31m², et le Diamètres basale des troncs entre 2.7 et 23 cm , L1-1 a les maximums valeurs pour tous ces variables, suivie par L-1-5 et L1-6 Le nombre de fruits varie entre 2 pour L2-11 et 800 fruits L2-8, L2-8, La teneur en huile dans les graines de chaque arbre varie entre 17% pour et 36%, Le rendement en huile varie entre 2g et 716g et avec le plus grand rendement en huile par arbre enregistrer par l’arbre L-39 suivie par L2-3 et L1-6 Cette figure montre un variable qualitative projeté sur les individus la coloré des graines, les arbres à faible intensité de coloration sont présentés en gris tels queL2-3, L2-12 et L2-3 Les arbres à forte intensité de coloration sont présentés en brun tels que L2-5, L3-8 L2-4 et L3-2, les restes d’individu ont une coloration intermédiaire